ОМ-БИОЧИП


Набор реагентов «ОМ-БИОЧИП» для одновременного количественного определения шести маркеров онкологических заболеваний (общей и свободной форм простат-специфического антигена (ПСА), альфа-фетопротеина (АФП), ракового эмбрионального антигена (РЭА), хорионического гонадотропина (ХГЧ), нейрон-специфической енолазы (НСЕ)) в сыворотке крови методом иммуно-флуоресцентного анализа на биологическом микрочипе.

Преимущества тест-системы «ОМ-БИОЧИП»

Традиционные иммунологические методы количественного анализа онкомаркеров позволяют определять содержание только одного маркера в одном клиническом образце. Для определения нескольких онкомаркеров необходимо использовать несколько типов наборов реагентов, что является трудоемким и дорогостоящим процессом.

Главное преимущество тест-системы «ОМ-БИОЧИП» состоит в том, что в результате одного анализа образца сыворотки крови мы можем получить одновременно семь показателей: концентрацию онкомаркеров АФП, РЭА, ХГЧ, НСЕ, ПСАобщ, ПСАсв и % ПСАсв/ПСАобщ.

Принцип работы – сэндвич-иммуноанализ с флуоресцентной регистрацией сигнала

Биочип содержит ячейки с иммобилизованными моноклональными антителами и ячейки с иммобилизованными антигенами (по 4 одинаковых ячейки в ряду).

В качестве проявляющих антител используют смесь моноклональных антител против ПСА, АФП, ХГЧ, РЭА и НСЕ, содержащих флуоресцентный краситель. Интенсивность флуоресценции гелевых ячеек биочипа, содержащих соответствующие иммобилизованные антитела, пропорциональна концентрации онко-маркера в образце.

Порядок проведения анализа с использованием тест-системы «ОМ-БИОЧИП»

1. К образцу сыворотки крови (50 мкл) добавляют смесь флуоресцентно-меченных проявляющих антител (10 мкл).
2. Образцы, калибровочные пробы и контрольную сыворотку наносят на биочипы.
3. Биочипы инкубируют с образцами, калибровочными пробами и контрольной сывороткой. В процессе инкубации происходит взаимодействие онко-маркеров из сыворотки крови с иммобилизованными на биочипе антителами и флуоресцентно-меченными антителами (сэндвич-иммуноанализ).
4. Получают флуоресцентные изображения биочипов с помощью биочип-анализатора.
5. Программа «ImagelAssay», разработанная в ИМБ РАН, на основе полученных изображений строит калибровочные кривые для определения 6 онко-маркеров, и рассчитывает концентрацию ПСА общего, ПСА свободного, АФП, ХГЧ, РЭА и НСЕ в анализируемом образце сыворотке крови.

Отчет в специализированной программе ImaGelAssay

Обсчет результатов иммуноанализа шести маркеров онкологических заболеваний на биочипах.

Результаты анализа:
25/10/2007 16:47:33
Партия №: 05.09.07

Контрольная сыворотка
[ХГЧ], МЕ/л = 80.90
[АФП], нг/мл = 76.31
[РЭА], нг/мл = 7.11
[НСЕ], нг/мл = 16.68
[ПСАобщ], нг/мл = 10.22
[ПСАсвоб], нг/мл = 2.52
([ПСАсвоб]/[ПСАобщ])% = 24.7

Основные характеристики тест-системы

Чувствительность

Минимальные достоверно определяемые набором концентрации маркеров не превышают:

• 0,3 нг/мл для ПСАобщ
• 0,2 нг/мл для ПСАсвоб
• 1,0 нг/мл для АФП;
• 0,4 нг/мл для РЭА;
• 3,0 МЕ/л для ХГЧ;
• 2,0 нг/мл для НСЕ.

Специфичность

Высокую специфичность анализа, проводимого с помощью набора, обеспечивает использование моноклональных антител, специфичных к каждому из шести определяемых маркеров и не имеющих перекрестного взаимодействия с другими компонентами сыворотки крови человека.

Диапазон измерения

• ПСАобщ 0,3 – 70 нг/мл,
• ПСАсвоб 0,2 – 60 нг/мл,
• АФП 1,0 – 600 нг/мл,
• РЭА 0,4 – 100 нг/мл,
• ХГЧ 3,0 – 400 МЕ/л,
• НСЕ 2,0 – 150 нг/мл

Хук-эффект

не определяется до концентрации ПСАобщ - 1500 нг/мл, ПСАсвоб - 1000 нг/мл, АФП - 4000 нг/мл, РЭА - 2000 нг/мл, ХГЧ - 7000 МЕ/л, НСЕ - 3000 нг/мл.

При больших концентрациях антигенов в образце величины флуоресцентного сигнала от иммобилизованных антигенов, образующих двойной комплекс с проявляющими антителами, позволяют оценить наличие ложно-заниженного результата. В этом случае в программе ImagelAssay появляется сообщение о необходимости развести образец и указание концентрация какого антигена в образце высока.

Воспроизводимость

Коэффициент вариации результатов определения ПСАобщ, ПСАсвоб, АФП, РЭА, ХГЧ и НСЕ и в одном и том же образце сыворотки крови человека с использованием данного набора не превышает 10%.

Диагностические характеристики

Было проведено сравнение результатов измерения шести онкомаркеров в сыворотке крови на биочипе с данными измерений референсными методами. В качестве референсных значений использовали концентрации онкомаркеров, определенные методом ИФА с использованием диагностических наборов фирмы «CanAg» (Швеция) для ПСАобщ, ПСАсвоб, АФП, РЭА и НСЕ и наборов фирмы «Иммунотех» (Россия) для ХГЧ. Была показана статистически значимая корреляция между результатами, полученными на биочипе и с помощью коммерческих диагностических наборов.

Состав тест-системы «ОМ-БИОЧИП» фото коробки с чипами тест-системы «ОМ-БИОЧИП»
Почему это важно?

В последние десятилетия отмечен устойчивый рост заболеваемости населения России онкологическими заболеваниями. Так, по данным Федеральной службы государственной статистики, в 2000 году среди жителей России было зарегистрировано 1226 тыс. случаев впервые диагностированных новообразований (8,4/1000), а в 2005 году - 1357 тыс. (9,6/1000).

Ранняя диагностика

Снижение заболеваемости и смертности от злокачественных новообразований онкологи связывают с широким внедрением профилактических мер и ранней диагностикой. У 50% онкологических больных выявленный обычными диагностическими методами рак оказывается генерализованным. Обнаружение злокачественных новообразований на ранних стадиях их развития позволяет проводить успешное лечение у 90% больных.
Генетические нарушения, имеющиеся в опухолевых клетках, приводят к изменению синтеза белков, в том числе синтезу мутантных форм, нарушениям экспрессии – повышении или снижении синтеза того или иного белка, появлению белков, характерных для эмбрионального периода развития. Качественная и количественная оценка всех этих белковых молекул обычно проводится иммунохимическими методами.

Словарь терминов:

Онкомаркеры - это антигены, которые могут быть выявлены в опухолевой ткани, и циркулируют в кровотоке онкологических больных.
Меньшая чувствительность и специфичность иммунохимических маркеров по сравнению с молекулярно-генетическими маркерами компенсируется большей пригодностью иммунохимических маркеров для мониторинга онкологических заболеваний и оценки эффективности проводимой терапии, так как их концентрация в крови строже зависит от размера опухоли и позволяет обнаруживать опухоли на ранней стадии заболевания.

Онко-
маркер Заболевание, при котором концентрация маркера повышена ПСА общий Рак предстательной железы ПСА свободный АФП рак печени и органов репродуктивной системы * РЭА рак желудочно-кишечного тракта, рак легких, рак печени ХГЧ рак легких, рак органов репродуктивной системы, рак желудочно-кишечного тракта* НСЕ мелкоклеточный рак легких, опухоли нейроэндокринного происхождения *концентрация ХГЧ и АФП существенно повышается при беременности